کنترل زیستی بیماری لکه قهوه‌ای قارچ خوراکی دکمه‌ای سفید( Agaricus bisporus) با استفاده از باکتری‌های همستیز
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
در این بررسی از قارچ‌های کلاهک دار خودرو در مناطق مستعد رویش قارچ در شهرستان‌های مختلف استان کردستان نمونه برداری انجام شد و نمونه ها به آزمایشگاه منتقل شدند. بخشی از قارچ انتخاب و پس از شستشو و ضد عفونی سطحی درون 4- 3 میلی لیتر آب مقطر سترون خرد گردید. سپس از سوسپانسیون حاصله 20 میکرولیتر بر روی محیطهای کشت Nutrient agar ، King B agar و Luria bertani agar پخش گردید. پتری‌ها سپس در انکوباتور با درجه حرارت ثابت 28 – 26 درجه سانتی گراد به مدت 15 روز نگهداری شد. باکتری‌های اندوفیت پس از رشد، مجدداً بر روی محیطهای ذکر شده خالص سازی گردید. درمجموع 66 جدایه باکتری از قارچ های خودرو جداسازی شد. به منظور بررسی تاثیر جدایه ها بر روی باکتری بیماریزای Pseudomonas tolaasii در شرایط in vitro سوسپانسیون جدایه های اندوفیت به غلظت تقریبی 108 سلول باکتری در هر میلی لیتر آب مقطر سترون تهیه و بر روی سطح محیط کشت King B agar بصورت نقطه ای کشت گردید. در تیمار شاهد از آب مقطر سترون استفاده شد. پتری‌ها در دمای 28 درجه سانتی گراد به مدت 48 ساعت نگهداری شدند. سپس کلنی باکتری‌های رشد یافته توسط پنبه سترون و الکل از سطح محیط کشت پاک گردید. یک قطعه پنبه آغشته به کلروفرم بر روی درب پتری گذاشته شد و پتری‌ها به صورت وارونه به مدت یک ساعت نگهداری شدند. پس از برداشتن پنبه 300 میکرولیتر از سوسپانسیون باکتری بیمارگر در سطح محیط کشت پخش گردید. پس از نگهداری پتری‌ها در دمای 28 درجه سانتی گراد به مدت 48 ساعت، قطر هاله بازدارنده اندازه‌گیری شد. از میان جدایه های مورد مطالعه 23 جدایه توانائی تشکیل هاله بازدارندگی را نشان دادند. به منظور تعیین بهترین باکتری همستیز در شرایط in vivo، سوسپانسیون باکتری‌های همستیز در رقت 108 و باکتری بیماری‌زا در رقت106 سلول در هر میلی لیتر تهیه و بر روی سطح بلوک‌های برش داده شده از قارچ دکمه‌ای سفید به میزان یک قطره قرار داده شدند. بر اساس قدرت بازدارندگی باکتری‌های همستیز به چهار گروه طبقه بندی شدند گروه اول دارای توانائی کنترل کنندگی کامل بیمارگر و فاقد علائم آشکار بیماری، گروه دوم دارای علائم ضعیف، گروه سوم دارای علائم متوسط و گروه چهارم دارای علائم شدید بودند. همچنین با استفاده از روش PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن 16S rDNA قطعه DNA به اندازه تقریبی 1500 جفت باز آلی تکثیر و تعیین توالی گردید. توالی نوکلئوتیدی بدست آمده در صورت لزوم تصحیح و با استفاده از برنامه Blast n با سایر سویه های استاندارد موجود در NCBI مقایسه گردید. نتایج نشان داد که براساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه های مورد مطالعه در گروه اول با کنترل کنندگی کامل بیمارگر دارای 99% شباهت با Brokhothrix thermosphacta و 100% شباهت با Bacillus mycoides بودند.
کلیدواژه ها