وقوع بیماری گل سبز کنجد در استان اصفهان، ایران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
کنجد در نواحی مختلف ایران کاشت و گل سبز یکی از مهمترین بیماری های آن محسوب می شود. در طی سالهای 93-94 برای تعیین وقوع آلودگی گل سبز کنجد در اردستان، زواره و مهاباد (استان اصفهان) 5 مزرعه به طور تصادفی در هر منطقه انتخاب و نمونه برداری در کادرهای 1 متری انجام شد. گیاهان آلوده و سالم بر اساس علایم مشخص بیماری و واکنش های زنجیره ای پلیمراز مستقیم و آشیانه ای تفکیک شدند. دی ان ای کل از 1 گرم بافت رگبرگ میانی گیاهان آلوده استخراج و آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز مستقیم و آشیانه ای با استفاده از جفت آغازگر های P1/P7، R16mF2/R16mR2 و R16F2n/R16R2 انجام شد. واکنش های زنجیره ای پلیمراز برای 35 سیکل با شرایط زیر انجام شد: یک دقیقه (دو دقیقه برای سیکل اول) در دمای °C94 برای واسرشتگی، دو دقیقه در دمای °C55 برای اتصال آغازگرها و سه دقیقه (10 دقیقه برای سیکل آخر) در دمای °C72 برای مرحله ی گسترش آغازگر. یک نمونه کنترل منفی عاری از دی ان ای در مخلوط واکنش در آزمون های پی سی آر استفاده شد. چند شکلی طولی قطعات برشی (2/1 کیلو جفت باز از قطعه ی دی ان ای ریبوزومی 16S) از محصول پی سی آر آشیانه ای با استفاده از آنزیم های AluI، HaeIII، MseI، RsaI وHinfI انجام و مقایسه ی الگوی نقوش حاصله برای تشخیص گروه فیتوپلاسما های شناخته شده مورد استفاده واقع شد. بر اساس نتایج وقوع آلودگی مزارع کنجد به بیماری فیلودی در تمام مناطق مورد نمونه برداری رویت و آلودگی کامل مزارع در اردستان مشاهده شد. مهمترین علایم بیماری شامل سبزایی، برگسانی، زردی و عقیمی گل بود. واکنش های زنجیره ای پلیمراز مستقیم و آشیانه ای با استفاده از جفت آغازگر های ذکر شده به ترتیب قطعاتی از دی. ان. ای ریبوزومی با اندازه تقریبی 1800، 1400 و 1200 جفت باز از ژن آر ان ای ریبوزومی را تکثیر کرد. نقوش حاصل از هضم آنزیمی 1200 جفت باز از محصول پی سی آر آشیانه ای استرین های جمع آوری شده با آنزیم های ذکر شده یکسان و متعلق به فیتوپلاسماهای گروه جاروک بادام زمینی ((16SrII بودند. محصول پی سی آر دو مرحلهای یک نمونه از کنجد دارای علایم در مهاباد تعیین ترادف شد و ترادف 1248 جفت باز از ژن آر ان ای ریبوزومی 16S تحت رس شمار KU297203 در بانک جهانی ترادف ها قرار داده شد. جستجو با برنامه بلاست نشان داد که میزان تشابه نوکلئوتیدی این فیتوپلاسما با اعضای گروه 16SrII بیشتر از 5/97 درصد می باشد. مقایسه چند شکلی طولی قطعات برشی مجازی محصول پی سی آر آشیانه ای نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با فیلودی کنجد اصفهان متعلق به زیر گروه D در گروه جاروک بادام زمینی می باشد.
کلیدواژه ها