باکتری Brennerian nigrifluens به عنوان تهدید جدید برای درختان گردو استان البرز
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
در ایران گردوی ایرانی یا گردوی سیاه به عنوان یکی از مهم‌ترین درختان آجیلی و با ارزش از لحاظ چوب مرغوب شناخته می‌شود. بیماری شانکر پوستی گردو به تنه و شاخه‌های درختان بالغ و جوان حمله می‌کند. در سال‌های اخیر بیماری شانکر پوستی گردو در ایران شیوع پیدا کرده است. این بیماری در شرایط محیطی مناسب (دما و رطوبت) به عنوان یک عامل جدی، درختان گردو را تهدید می‌کند. با اینکه درخت گردو بومی استان البرز می‌باشد، اما این بیماری تاکنون از این استان گزارش نشده بود. در تابستان 1392، از مناطق مختلف استان البرز، از شاخه‌ها و تنه درختان دارای علائم شانکر پوستی همراه با تراوش شیرابه‌ی قهوه‌ای تا سیاه رنگ از شکاف‌های روی تنه و بافت مردگی پوست داخلی، نمونه برداری انجام شد. باکتری‌های بدست آمده از نمونه‌ها، روی محیط کشت ائوزین متیلن بلو (EMB) خالص سازی شدند. ده جدایه‌ای که در واکنش گرم و اکسیداز پاسخ منفی و قابلیت رشد در هر دو محیط هوازی و بی‌هوازی را داشتند برای بررسی و توصیفات بیشتر انتخاب شدند. بیماری‌زایی جدایه‌های انتخاب شده، با ایجاد زخم روی شاخه‌های گردوی یک ساله و سپس مایه‌زنی سوسپانسیون هر یک از باکتری‌ها با غلظت 109 سلول بر میلی‌لیتر، روی این زخم‌ها انجام شد. همچنین آب مقطر سترون بعنوان شاهد استفاده شد. برای بررسی ویژگی‌های ژنوتیپی، DNA ژنومی جدایه‌ها استخراج شد و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با استفاده از جفت آغازگرهای اختصاصی F1 و C3 انجام شد. علاوه بر این از آغازگرهای recAR و recAF برای شناسایی ملکولی جدایه‌ها استفاده شد و همچنین جهت بررسی تنوع ژنتیکی جدایه‌ها، از روش rep-PCR استفاده شد. تمامی جدایه‌های بیماری‌زا روی نهال‌های گردو مجددا از بافت‌های آلوده جداسازی شدند. پس از استخراج DNA ژنومی این جدایه‌ها، تکثیر قطعات با استفاده از آغازگرهای ذکر شده انجام و نتایج توالی یابی با نتایج جدایه‌های اولیه (اصلی) بررسی شد. یک ماه پس از مایه‌کوبی نهال‌های گردو با سوسپانسیون باکتری‌ها، لکه‌های نکروتیک روی پوست و خطوط تیره در قسمت چوبی شاخه‌ها مشاهده شد. هیچ یک از علائم ذکر شده در گیاهان مایه‌کوبی شده با آب مشاهده نشد. در این بررسی با توجه به نتایج فنوتیپی و ژنوتیپی، باکتری Brnneria nigrifluens به عنوان عامل شانکر پوستی گردو شناخته شد. همچنین تنوع ژنتیکی قابل ملاحظه‌ای در بررسی الگوی اثر انگشت ژنومی جدایه‌ها با کمک نشانگرهای rep-PCR مشاهده نشد. این عدم تنوع احتمالا بخاطر کشت ارقام یکسان نهال‌های گردو در مناطق مختلف می باشد. در این تحقیق برای اولین بار شانکر سطحی بر روی درختان گردوی استان البرز گزارش شد.
کلیدواژه ها