اولین گزارش از جدایه بیماریزای Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens از گیاه یونجه در ایران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
باکتری Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens عامل پژمردگی لوبیا، به عنوان یکی از بیمارگرهای مهم لوبیا در جهان و ایران شناخته می‌شود. علائم این باکتری روی لوبیا به صورت زردی بین رگبرگی و پژمردگی بروز می‌یابد و به صورت سیستمیک در گیاه حرکت می‌کند. جدایه‌هایی از این باکتری از سایر گیاهان غیرمیزبان نظیر ذرت، گندم، یونجه و آفتابگردان نیز گزارش شده است که روی گیاه لوبیا بیماریزا بوده‌اند. طی بازدیدهای انجام گرفته در بهار 1395 از مناطق جنوبی استان فارس (فیروزآباد) تعدادی نمونه یونجه جمع آوری گردید و از کشت عصاره بافت آن‌ها روی محیط YPGA کلونی‌های زرد رنگ، گرد و محدب جداسازی شد. کلونی‌های این باکتری روی محیط YDC به رنگ زرد و بسیار روان بودند که مشخصه‌ی پاتووار C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens است. جدایه‌ها گرم مثبت، کاتالاز مثبت، هوازی اجباری و پکتیناز منفی بودند. در آزمون بیماری‌زایی روی لوبیا علائم مشخص بیماری شامل زردی بین رگبرگی و پژمردگی بروز پیدا کرد. به منظور شناسایی دقیق جدایه‌ها از آغازگر اختصاصی Cff و تعیین توالی ژن gyrB استفاده شد. برای این منظور جدایه‌های مورد بررسی به مدت 48 ساعت روی محیط اختصاصی YDC کشت و DNA ژنومی آن‌ها به روش جوشاندن استخراج شد. تکثیر DNA ژنومی با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی CffFOR2/CffREV4 انجام گرفت. نتیجه PCR تکثیـر یک قطعـه DNA مـورد انتظـار به انـدازه حـدود 306 جفت بـاز بـود. بـا تـوجه به آزمـون‌های ابتـدایی بیـوشیمیایی روی جدایه‌های خالص شده و همچنیـن بیماریزا بـودن ایـن جدایـه‌ها روی لوبیـا و نتـایج حـاصل از واکنش زنجیـره‌ای پلـی‌مراز، باکتـری مـذکور C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens تشخیص داده شد. برای اطمینان از صحت نتایج حاصل، محتوای DNA ژنومی توسط پرایمر اختصاصـی ژن gyrB تکثیر و برای تعیین ترادف نوکلئوتیدی به شرکت Bioneer کره جنوبی ارسال گردید. نتایج حاصل از تعیین ترادف نمونه‌های مورد بررسی و بلاست آن‌ها با داده‌های بانک اطلاعاتی NCBI شباهت 99 درصدی را با جدایه‌های استاندارد ایرانی C. f. pv. flaccumfaciens Tom50 (با رس‌شمار KU739087)، P990 (با رس‌شمار KU739093) و 10eg (با رس‌شمار KU739088) نشان دادند. با توجه به نتایج حاصل از این تحقیق، این اولین گزارش از وجود باکتری Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens روی گیاه یونجـه در ایـران مـی‌باشد. بر اساس تحقیقات گذشته به نظر می‌رسد که این باکتری عمومـا روی میزبـان‌هایی مانند یـونجه، گوجه فرنگی، فلفل، بادنجان، آفتابگـردان و گنـدم به صـورت اپـی‌فیت رشد مـی‌کند و باکتـری از گیاهان غیرمیزبان به منظور زنده‌مانی و بقای خود برای سال آینده استفاده می‌کند که از دیدگاه اپیدمیولوژیکی و مدیریت بیماری بسیار حائز اهمیت است.
کلیدواژه ها