جداسازی و شناسایی باکتری‌های اندوفیت محرک رشد گیاه از درختان گردوی استان کرمانشاه

عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران

درخت گردو (Juglans sp.) از لحاظ اکولوژیکی، دارویی، ارزش غذایی و اقتصادی در ایران و جهان اهمیت بسیار بالایی دارد. گردوی ایرانی با نام علمی Juglans regia L. شناخته می‌شود شناسایی باکتریهای اندوفیت محرک رشد گیاه امروزه مورد توجه بسیاری از محققان دنیا قرار گرفته است. در بهار و تابستان سال 1394 ضمن بازدید از باغات گردو در مناطق مختلف استان کرمانشاه از ریشه، ساقه و برگ درختان سالم نمونه برداری صورت گرفت و نمونه ها به آزمایشگاه بیماری شناسی گیاهی منتقل شدند. بافت آلوده پس از ضد عفونی سطحی در 3-2 میلی لیتر آب مقطر سترون به قطعات کوچک خرد گردید. از سوسپانسیون حاصله بر روی محیط کشت King B agar کشت و به مدت 15 روز در دمای 28- 26 درجه سانتی گراد نگهداری گردید. کلنی های رشد یافته سپس جدا سازی و خالص سازی شدند و براساس آزمون‎‌های استاندارد باکتری شناسی مورد شناسایی قرار گرفتند. با استفاده از روش PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن 16S rDNA سه قطعه DNA به اندازه تقریبی هر کدام 1500 جفت باز آلی از سه کلنی مختلف تکثیر و تعیین توالی گردید. توالی‌های نوکلئوتیدی به دست آمده در صورت لزوم تصحیح و با استفاده از برنامه Blast n با سایر سویه های استاندارد موجود در NCBI مقایسه گردید. جدایه اول با کد RR3 دارای واکنش مثبت در آزمون‌های کاتالاز و تولید پروتئاز و دارای واکنش منفی در آزمون‌های اکسیداز، فلورسنت، گرم، تولید آنتی‌بیوتیک و لیپاز بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Bacillus simplex بود. این جدایه توانایی تولید 9 میکروگرم بر میلی‌لیتر اکسین، 15 میکروگرم بر میلی‌لیتر جیبرلین، توانایی تثبیت ازت و قابلیت حل کردن فسفات را داشت. جدایه دوم با کد RB1 دارای واکنش‌ مثبت در آزمون‌های اکسیداز، کاتالاز، تولید پروتئاز، آنتی بیوتیک و لیپاز و دارای واکنش منفی در آزمون‌های فلورسنت و گرم بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 98% شباهت با Pseudomonas frederiksbergensis بود. این جدایه توانایی تولید 65 میکروگرم بر میلی‌لیتر اکسین، 13 میکروگرم بر میلی‌لیتر جیبرلین، توانایی تثبیت ازت و قابلیت حل کردن فسفات را داشت. جدایه سوم با کد KS1 دارای واکنش مثبت در آزمون‌های اکسیداز، کاتالاز، فلورسنت، تولید پروتئاز و تولید سیانید هیدروژن و دارای واکنش منفی در آزمون‌های گرم، تولید آنتی بیوتیک و تولید لیپاز بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Pseudomonas brassicacearum بود. این جدایه توانایی تولید 64 میکروگرم بر میلی‌لیتر اکسین، 7/15 میکروگرم بر میلی‌لیتر جیبرلین و قابلیت حل کردن فسفات را داشت.

اندوفیت؛ گردو؛ جیبرلین؛ اکسین