پیش بینی و آنالیز ساختاری تریپسین معده ی میانی شب پره هندی Plodia interpunctella
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
سید علی همتی ، سعید محرمیپور ، رضا حسن ساجدی ، مجید تقدیر ، محمد مهرآبادی ، حسین رحمانی ، سید مسعود اعتضاد
دانشگاه تربیت مدرس
چکیده
شب پرهی هندی (Lep.: Pyralidae)(Hübner)Plodia interpunctella یکی از مهمترین آفات انباری در ایران و سایر نقاط جهان محسوب میشود.کنترل مناسب شب پرهی هندی نیاز به کاربرد حشرهکشهای مطلوب در برنامهی کنترل تلفیقی آفات دارد. مهارکنندههای پروتئازی با منشاء طبیعی میتوانند گزینههای مناسبی برای این منظور باشند. مهارکنندههای پروتئازی باعث اختلال در عملکرد فیزیولوژیکی حشرات گیاهخوار میگردند. پروتئازها نقش مهمی در هضم پروتئینها و حفظ نیتروژن مورد نیاز دارند.غیرفعال شدن آنزیمهای پروتئازی بوسیلهی مهارکنندههای پروتئاز، منجر به اختلال در جذب مواد غذایی، تاخیر در رشد و نمو و متعاقب آن مرگ به علت گرسنگی رخ میدهد.از میان پروتئازهای گوارشی راسته بالپولکداران، تریپسین گزینه مناسبی برای مهار میباشد. برای درک برخی از خصوصیات آنزیم تریپسین لارو سن پنجم شب پره هندی شامل ساختار جایگاه فعال و پروفایل pH قلیایی، نیاز به پیشبینی و آنالیز ساختاری آن میباشد.ابتدابه جستجوی توالی آمینواسیدی و ساختار کریستالی آنزیم تریپسین شب پره هندی از پایگاههای اطلاعاتی پرداخته شد. بدین جهت پس از بدست آوردن توالی تریپسین که فاقد ساختار تعیین شده بود، توالیهای تریپسین مشابه با ساختار تعیین شده از موجودات دیگر، جهت استفاده به عنوان الگو در نرم افزار مدلسازی جستجو و یافت شد. سپس مدلهای بدست آمده از مدلسازی، مورد آزمونهای مختلف قرار گرفتند تا ساختار نهایی با ضریب اطمینان بالاتر بر اساس این آزمونها، برای ادامهی کار انتخاب گردید.پیشبینی یک مدل ساختاری قابل اطمینان برای تریپسین معدهی میانی لارو سن پنجم شب پره هندی، بر اساس ساختار کریستالی آنزیم تریپسین Fusarium oxisporum (Schlecht) (PDB: 1GDU)و با استفاده از نرم افزار Modeller 9.13 ساخته شد. نتایج نرم افزار مدللر شامل 10 مدل برای هر توالی اسید آمینهای بود. بهترین مدل برازش شده برای آنزیم تریپسین شب پره هندی با بکارگیری نتایج آزمونهای حاصل از نرم افزارهای ProCheck و Verify_3D انتخاب شده و ساختار 3 بعدی تریپسین برای مطالعات بعدی به کار گرفته شد. با استفاده از اطلاعات سرور Anola امتیاز QMEAN6 جهت آزمون کیفیت مدل پیشبینی شده محاسبه گردید و نتایج نشان داد که مدل انتخابی واجد بهترین خصوصیات بوده است. همچینین ساختار دوم تریپسین تخلیص شده با استفاده از near-UV circular dichorism بدست آمد. نتایج نشان داد که ساختار دوم تریپسین شامل %9/39 مارپیچ آلفا،%35 صفحات بتا و %1/25 رندوم کویل بوده که مشابهت قابل توجهی را با نتایج بدست آمده از مدل پیش بینی شده تریپسین شب پره هندی نشان داد. هدف این تحقیق بدست آوردن درک بهتری از مدل ساختار 3 بعدی پیشبینی شده جهت فراهم آوردن جنبههای جدید در کنترل این آفت خسارتزا بوده است. بکارگیری همزمان تکنیکهای تئوریک و آزمایشگاهی میتواند برای پیشبینی ساختار آنزیمی با قابلیت اطمینان بالا مفید بوده و به طراحی مهارکنندههایی با خصوصیات مطلوب مهارکنندگی تریپسین منجر گردد.
کلیدواژه ها