بررسی فلاونوئیدهای تولید شده ناشی از اثر بیوکنترلی Bacillus subtilis روی آلودگی Agrobacterium tumifacies در گیاه توتون
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
فلاونوئیدها یک گروه از متابولیتهای ثانویه گیاهی هستند که مسیر بیوسنتزی آنها بخشی از مسیر فنیل پروپانوئیدی
است. بدلیل ساختار متنوع شیمیایی و تنوع حاصل از جایگاههای اتصال نقش‌های مهمی در عملکرد گیاهان دارند. از مهمترین دلایل اهمیت فلاونوئیدها، عملکرد آنها در مکانیسمهای دفاعی گیاه می باشد. این ترکیبات به محل آلودگی منتقل و واکنش فوق حساسیت (HR) را که اولین مکانیسم دفاعی توسط گیاه است را ایجاد می کنند و موجب مرگ برنامه ریزی شده سلول می‌گردند. حضور این ترکیبات، در مقاومت گیاه به بیمارگرهای قارچی و باکتریایی اهمیت زیادی دارد. مطالعات نشان داده است که تیمار گیاه با آگروباکتریوم منجربه فعال سازی سیستم دفاعی گیاه برای مقابله با باکتری می شود که به دنبال آن مقادیر فنل و فلاونوئید تولید شده در گیاه بالا می رود . این تحقیق با هدف امکان بررسی اثر بیوکنترلیBacillus subtilis بر آلودگی آگروباکتریومی گیاه توتون از طریق سنجش میزان فلاونوئیدها، انجام شد. بدین منظور از استرین IBRC-M10701 باکتری Agrobacterium tumefaciens و استرین ATCC21332 باکتری Bacillus subtilis استفاده شد. به منظور تهیه زادمایه، سویه های IBRC-M10701 و ATCC21332 به طور جداگانه در 40 میلی لیتر محیط کشت مایع به ترتیب LB و NB، در دمای 28 درجه سانتیگراد روی شیکر rpm 180 به مدت 24 ساعت کشت داده شدند.گیاهچه های توتون پس از مایه زنی توسط باکتریهای فوق مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور سنجش فلاونوئید کل از معرف AlCl3 استفاده گردید. جذب فلاونوئید کل محلول ها با دستگاه اسپکترومتری اندازه گیری شد. آنالیز محتوای کل فلاونوئیدها بیانگر بالا بودن این ترکیبات در تیمار گیاه با آگروباکتریوم نسبت به سایر تیمارها بود. شناسایی ترکیبات فلاونوئیدی تولید شده در تیمارها با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) براساس نمونه های استاندارد صورت گرفت. همچنین اندازه گیری میزان فلاونوئیدهای شناسایی شده، از روش محاسبه سطح زیر منحنی کروماتوگرام حاصل از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با استفاده از منحنی استاندارد هر یک از ترکیبات صورت گرفت. نتایج نشان داد که از بین ترکیبات شناسایی شده بیشترین مقادیر به ترتیب مربوط به فلاونوئیدهای روتین و وایتکسین بود. به طور کلی ایزوفلاون ها و فلاونولها بعنوان عوامل ضد میکروبی موثر، نقش به سزایی در پاسخ به جراحات میکروبی دارند. در این تحقیق، تیمار با آگروباکتریوم بیشترین میزان ترکیبات فلاونوئیدی را نسبت به سایر تیمارها از خود نشان داد که این امر ناشی از وجود و فعالیت باکتری بیمارگر آگروباکتریوم در گیاه توتون می باشد. کاهش این ترکیبات در تیمار باسیلوس- آگروباکتریوم می تواند دلیلی بر اثر مثبت بیوکنترلی باسیلوس بر آلودگی آگروباکتریومی گیاه توتون باشد.
است. بدلیل ساختار متنوع شیمیایی و تنوع حاصل از جایگاههای اتصال نقش‌های مهمی در عملکرد گیاهان دارند. از مهمترین دلایل اهمیت فلاونوئیدها، عملکرد آنها در مکانیسمهای دفاعی گیاه می باشد. این ترکیبات به محل آلودگی منتقل و واکنش فوق حساسیت (HR) را که اولین مکانیسم دفاعی توسط گیاه است را ایجاد می کنند و موجب مرگ برنامه ریزی شده سلول می‌گردند. حضور این ترکیبات، در مقاومت گیاه به بیمارگرهای قارچی و باکتریایی اهمیت زیادی دارد. مطالعات نشان داده است که تیمار گیاه با آگروباکتریوم منجربه فعال سازی سیستم دفاعی گیاه برای مقابله با باکتری می شود که به دنبال آن مقادیر فنل و فلاونوئید تولید شده در گیاه بالا می رود . این تحقیق با هدف امکان بررسی اثر بیوکنترلیBacillus subtilis بر آلودگی آگروباکتریومی گیاه توتون از طریق سنجش میزان فلاونوئیدها، انجام شد. بدین منظور از استرین IBRC-M10701 باکتری Agrobacterium tumefaciens و استرین ATCC21332 باکتری Bacillus subtilis استفاده شد. به منظور تهیه زادمایه، سویه های IBRC-M10701 و ATCC21332 به طور جداگانه در 40 میلی لیتر محیط کشت مایع به ترتیب LB و NB، در دمای 28 درجه سانتیگراد روی شیکر rpm 180 به مدت 24 ساعت کشت داده شدند.گیاهچه های توتون پس از مایه زنی توسط باکتریهای فوق مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور سنجش فلاونوئید کل از معرف AlCl3 استفاده گردید. جذب فلاونوئید کل محلول ها با دستگاه اسپکترومتری اندازه گیری شد. آنالیز محتوای کل فلاونوئیدها بیانگر بالا بودن این ترکیبات در تیمار گیاه با آگروباکتریوم نسبت به سایر تیمارها بود. شناسایی ترکیبات فلاونوئیدی تولید شده در تیمارها با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) براساس نمونه های استاندارد صورت گرفت. همچنین اندازه گیری میزان فلاونوئیدهای شناسایی شده، از روش محاسبه سطح زیر منحنی کروماتوگرام حاصل از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با استفاده از منحنی استاندارد هر یک از ترکیبات صورت گرفت. نتایج نشان داد که از بین ترکیبات شناسایی شده بیشترین مقادیر به ترتیب مربوط به فلاونوئیدهای روتین و وایتکسین بود. به طور کلی ایزوفلاون ها و فلاونولها بعنوان عوامل ضد میکروبی موثر، نقش به سزایی در پاسخ به جراحات میکروبی دارند. در این تحقیق، تیمار با آگروباکتریوم بیشترین میزان ترکیبات فلاونوئیدی را نسبت به سایر تیمارها از خود نشان داد که این امر ناشی از وجود و فعالیت باکتری بیمارگر آگروباکتریوم در گیاه توتون می باشد. کاهش این ترکیبات در تیمار باسیلوس- آگروباکتریوم می تواند دلیلی بر اثر مثبت بیوکنترلی باسیلوس بر آلودگی آگروباکتریومی گیاه توتون باشد.
کلیدواژه ها